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foliar y tal vez los más interesantes son aquellos relacionados con resistencia a 
patógenos (Philips & Crouzillat, 1999). 
 

 

3.5 RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) 

 

El RFLP ha sido una técnica usada en los programas de investigación desde los años 
setenta. Es una técnica que permite distinguir organismos entre sí, mediante el análisis 
de los patrones que se derivan al romper el ADN en pequeños fragmentos.  Si dos 
organismos son diferentes, en la distancia que exista entre dos sitios de ruptura 
particular, la longitud de los fragmentos generados será distinta cuando el ADN se 
digiera o rompa con una enzima de restricción. La similitud de los patrones generada 
puede ser usada entonces para diferenciar especies e inclusive razas entre sí. 
 
En resumen, su metodología consiste en los siguientes pasos: 
 
1. El ADN es extraído de las hojas de las plantas a examinar, o de la sangre de los 

individuos que se quiere comparar. 

 
2. El ADN de la muestra es cortado en fragmentos, que resultan ser de tamaños 

diversos, precisamente porque estos tamaños dependen de la diversidad y 
variabilidad genética de la muestra. El nombre RFLP (Restriction Fragment Length 
Polymorphism) deriva de la propiedad de ciertas enzimas llamadas “de restricción” 
para cortar regiones específicas del ADN que son muy variables (hipervariables) de 
individuo a individuo, lo que ayuda a detectar precisamente el polimorfismo que se 
está buscando. 

  
3. Los fragmentos de ADN son colocados en una superficie gelatinosa (gel de agarosa) 

con el propósito de someterlos a una separación con base en su diferente tamaño. 
       

4. Se sumerge el gel en una solución conductora y luego se aplica una corriente 

eléctrica a lo largo del gel.  A este proceso (pasos 3 y 4) se le llama “electroforesis”. 

 
5. Puesto que el gel de agarosa tiene poros, los fragmentos más pequeños de ADN 

migrarán hacia el ánodo (polo positivo) más rápidamente que los fragmentos de 
ADN que sean más largos. 

 

 

         

6. Los fragmentos de ADN así separados se transfieren luego por adhesividad a una 

membrana de nylon. A este proceso se le conoce como “Southern blotting”. 
         

7. La membrana de nylon contiene ahora covalente y los fragmentos de ADN 

firmemente adheridos en la misma posición en que migraron sobre el gel durante el 
proceso 

de 

electroforesis.       

         

8. Esta membrana de nylon es expuesta a sondas marcadas de ADN, que son 

pequeños fragmentos sintéticos de ADN de secuencia conocida y que corresponden 

Instituto de Agricultura, Recursos Naturales y Ambiente de la URL                                        Serie técnica No. 15